β-FR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403346

Übersicht

FOLR2 kodiert den Beta-Folatrezeptor (β-FR), einen über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) in der Zellmembran verankerten Zelloberflächenrezeptor, der Folate bindet und deren Aufnahme vermittelt. Dadurch unterstützt er den Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel und die Nukleotidbiosynthese. Über die Regulation der intrazellulären Folatverfügbarkeit beeinflusst β-FR die DNA-Synthese sowie methylierungsabhängige Prozesse, die mit Programmen der Proliferation und Differenzierung verknüpft sind. Beim Menschen wird FOLR2 häufig als Marker spezifischer myeloider und Makrophagen-Subpopulationen verwendet und in Zusammenhängen untersucht, in denen folatabhängiger Stoffwechsel und der Zustand von Immunzellen umprogrammiert werden. Veränderte FOLR2-Expressionsmuster stehen mit entzündlichen Mikroumgebungen und krankheitsrelevantem Immun-Remodeling in Verbindung und sind ein Antrieb für mechanistische Studien in Primärzellen und Modellsystemen.

Das β-FR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FOLR2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FOLR2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FOLR2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die β-FR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FOLR2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der β-FR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FOLR2-Exone abzielen, die für die β-FR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FOLR2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom β-FR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom β-FR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FOLR2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das β-FR HDR-Plasmid (h) und β-FR HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FOLR2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FOLR2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.