Plasmide CRISPR d'Activation (h) β-defensin 124: sc-410392-ACT

DEFB124 code la β‑défensine 124 humaine, un petit peptide cationique de la famille des défensines, qui contribue à l’immunité innée épithéliale par une activité antimicrobienne directe et par la modulation des réponses inflammatoires locales. Les β‑défensines participent aux processus de barrière des muqueuses et peuvent influencer les signaux chimiotactiques ainsi que les réseaux de cytokines qui façonnent le recrutement des leucocytes et les interactions hôte–microbe. Des profils d’expression des défensines altérés ont été associés à une immunité muqueuse dysrégulée et à des états inflammatoires chroniques, ce qui justifie l’étude de DEFB124 en biologie des infections et en homéostasie immunitaire. Dans le contexte des voies reproductrices et urogénitales, des membres de la famille des défensines sont également étudiés pour leur rôle dans le maintien de l’intégrité de la barrière et de l’équilibre du microbiome.

β-defensin 124 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DEFB124 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

β-defensin 124 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DEFB124 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DEFB124, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de β-defensin 124. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DEFB124 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de β-defensin 124 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie β-defensin 124 dans les cellules tumorales présentant une expression de DEFB124 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.