Plasmide CRISPR d'Activation (h) β1 Tubulin: sc-400113-ACT

TUBB1 code la β1‑tubuline, une isotype de β‑tubuline enrichie dans les plaquettes et les mégacaryocytes, qui polymérise avec l’α‑tubuline pour former des microtubules, assurant l’organisation du cytosquelette, le transport intracellulaire et la dynamique du fuseau mitotique. Dans les cellules hématopoïétiques, la β1‑tubuline contribue à l’extension des proplaquettes et à la biogenèse plaquettaire en régulant l’assemblage des microtubules et la formation de la bande marginale. Les processus dépendants des microtubules, contrôlés par la dynamique de la tubuline, s’articulent avec la progression du cycle cellulaire, le trafic vésiculaire et les voies de remodelage du cytosquelette. Des altérations génétiques de TUBB1 ont été associées à des anomalies de la taille et du nombre de plaquettes, ce qui en fait une cible utile pour étudier la thrombopoïèse et les troubles du cytosquelette dans des modèles cellulaires humains.

β1 Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TUBB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

β1 Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TUBB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TUBB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de β1 Tubulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TUBB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de β1 Tubulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie β1 Tubulin dans les cellules tumorales présentant une expression de TUBB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.