α-tectorin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405876

Panoramica

TECTA codifica l’α-tectorina, una delle principali glicoproteine non collagene della membrana tettoriale dell’orecchio interno, che contribuisce a organizzare l’architettura della matrice extracellulare necessaria per l’accoppiamento meccanoelettrico nelle cellule ciliate cocleari. L’α-tectorina contribuisce alla rigidità della membrana e alle micromeccaniche che sostengono la deflessione delle stereociglia e la sintonizzazione in frequenza, collegando i processi di assemblaggio della matrice extracellulare e di proteostasi alla trasduzione del segnale uditivo. Le varianti in TECTA sono associate a fenotipi di perdita uditiva ereditaria, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio delle relazioni tra genotipo, struttura e funzione nelle matrici extracellulare cocleari. La perdita di funzione dell’α-tectorina è comunemente studiata in modelli di sviluppo della membrana tettoriale, biomeccanica delle cellule ciliate e fisiologia della via uditiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-tectorin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TECTA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TECTA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TECTA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-tectorin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TECTA per lo studio della segnalazione di α-tectorin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TECTA critici per la funzione di α-tectorin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TECTA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α-tectorin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal α-tectorin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TECTA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α-tectorin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR α-tectorin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TECTA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TECTA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.