Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO α1A-AR (h): sc-401726
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- α1A-AR Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique α1A-AR, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: α1A-AR Antibody (4D8): sc-100291
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO α1A-AR (h) | sc-401726 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
ADRA1A code le récepteur adrénergique humain α1A (α1A-AR), un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) qui s’accouple préférentiellement à Gq/11 afin d’activer la phospholipase C, d’augmenter le Ca2+ intracellulaire et de stimuler une signalisation dépendante de la PKC. α1A-AR régule la contraction du muscle lisse, le tonus vasculaire et la neurotransmission, et peut activer en aval les voies MAPK/ERK, qui influencent la prolifération cellulaire et des programmes transcriptionnels. L’activité du récepteur contribue au contrôle adrénergique de la physiologie cardiovasculaire et génito-urinaire et module des réseaux de signalisation sensibles au stress dans de nombreux tissus. Une signalisation adrénergique dérégulée et une expression altérée d’ADRA1A ont été étudiées notamment dans l’hypertension, la fonction des voies urinaires basses et la signalisation du microenvironnement tumoral, offrant un point d’entrée mécanistique pour des recherches centrées sur les voies de signalisation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α1A-AR (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADRA1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADRA1A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADRA1A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α1A-AR.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADRA1A pour l'étude de la signalisation de α1A-AR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de ADRA1A essentiels à la fonction de α1A-AR
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADRA1A pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le α1A-AR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le α1A-AR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADRA1A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le α1A-AR plasmide HDR (h) et le α1A-AR (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADRA1A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADRA1A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.