Plasmide CRISPR/Cas9 KO α-parvin (h): sc-405769

Présentation

PARVA code l’α-parvine, un adaptateur d’adhésion focale se liant à l’actine, qui s’associe à l’intégrine-linked kinase (ILK) et à PINCH pour former le complexe IPP, reliant les intégrines au cytosquelette d’actine. Via des interactions avec la paxilline et d’autres composants des adhésions, l’α-parvine contribue à l’assemblage des adhésions focales, au remodelage du cytosquelette et à la mécanotransduction lors de l’étalement et de la migration cellulaires. La signalisation dépendante de PARVA s’articule avec les voies intégrines/FAK et la dynamique de l’actine régulée par les petites GTPases, soutenant la survie dépendante de l’adhésion et la polarité cellulaire. La dérégulation de ces processus est pertinente pour l’étude de l’invasion des cellules tumorales, du remodelage tissulaire lié à la fibrose, ainsi que de la biologie cardiovasculaire et des muscles lisses, où des altérations de l’adhésion et de la signalisation contractile sont impliquées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α-parvin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PARVA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PARVA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PARVA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α-parvin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PARVA pour l'étude de la signalisation de α-parvin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PARVA essentiels à la fonction de α-parvin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PARVA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α-parvin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le α-parvin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PARVA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α-parvin plasmide HDR (h) et le α-parvin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PARVA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PARVA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.