Plásmido CRISPR de Activación (h) α-internexin: sc-402920-ACT

INA codifica la α-internexina, una proteína de filamento intermedio tipo IV enriquecida en neuronas que se integra en la red de neurofilamentos para sostener el calibre axonal, la estabilidad del citoesqueleto y el crecimiento de neuritas. La α-internexina participa en la dinámica de ensamblaje de los filamentos intermedios y se coordina con otros componentes del citoesqueleto neuronal durante la diferenciación y la maduración sináptica. La expresión alterada o la agregación de filamentos intermedios neuronales se asocia a mecanismos relevantes para la neurodegeneración y las lesiones del sistema nervioso, incluidos el transporte axonal alterado y el estrés de la proteostasis. Como marcador asociado a linaje, INA también se utiliza para estudiar la identidad neuronal y los programas de diferenciación en modelos neurales del desarrollo y derivados de células madre.

α-internexin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de INA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α-internexin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus INA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional INA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α-internexin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo INA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α-internexin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α-internexin en células tumorales con expresión de INA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.