Partículas Lentivirales de Activación (h) αENaC: sc-401123-LAC

SCNN1A codifica la subunidad alfa del canal epitelial de sodio humano (αENaC), un componente formador del poro del complejo ENaC sensible a la amilorida, que media la entrada electrogénica de Na⁺ a través de las membranas apicales en tejidos epiteliales. Al controlar la absorción de sodio y su acoplamiento al movimiento osmótico de agua, αENaC contribuye a la homeostasis del líquido de la superficie de las vías respiratorias, la reabsorción de sodio en los túbulos renales y la regulación del volumen epitelial. La actividad de ENaC se ajusta mediante el procesamiento proteolítico, el tráfico dependiente de ubiquitina a través de NEDD4L y vías de señalización hormonal que incluyen SGK1 regulada por aldosterona, lo que vincula a SCNN1A con el transporte iónico y la fisiología de la barrera epitelial. La desregulación del manejo de sodio mediado por ENaC se asocia con trastornos del equilibrio de sal y líquidos y se ha estudiado en el contexto de fenotipos de hidratación de las vías respiratorias y anomalías electrolíticas renales.

Las partículas de activación lentiviral αENaC (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SCNN1A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral αENaC (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SCNN1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de αENaC. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SCNN1A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.