Plásmido Doble Nickase (h) αA-crystallin: sc-402047-NIC

CRYAA codifica la αA-cristalina humana, una pequeña proteína de choque térmico que funciona como chaperona molecular independiente de ATP para estabilizar proteínas parcialmente desplegadas y limitar su agregación bajo estrés. En el cristalino del ojo, la αA-cristalina favorece la proteostasis y contribuye a la transparencia del cristalino al amortiguar el daño inducido por oxidación, calor y radiación UV, además de modular la organización del citoesqueleto y la señalización apoptótica en múltiples tipos celulares. La proteína participa en redes de respuesta al estrés vinculadas al manejo de proteínas desplegadas y al mantenimiento de ensamblajes proteicos de larga vida. La desregulación o las mutaciones de CRYAA se asocian con la cataratogénesis y se han estudiado en el contexto de respuestas al estrés proteotóxico relevantes para fenotipos neurodegenerativos y miopáticos.

αA-crystallin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CRYAA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CRYAA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CRYAA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CRYAA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.