A030007L17Rik Ativadores

Os activadores A030007L17Rik comuns incluem, entre outros, a forskolina CAS 66575-29-9, o PMA CAS 16561-29-8, a ionomicina CAS 56092-82-1, o galato de (-)-epigalocatequina CAS 989-51-5 e o dicloridrato de espectinomicina penta-hidratado CAS 22189-32-8.

Os activadores A030007L17Rik representam uma classe de compostos químicos que podem aumentar a atividade do gene A030007L17Rik. A fase inicial da identificação desses activadores envolve o rastreio de alto rendimento (HTS). Esta abordagem é fundamental para peneirar grandes bibliotecas de produtos químicos para identificar aqueles que têm o efeito desejado na atividade do gene. Especificamente, neste contexto, é criado um ensaio de gene repórter em que o promotor A030007L17Rik controla a expressão de um gene repórter detetável. O gene repórter codifica normalmente uma proteína capaz de gerar um sinal mensurável, como a fluorescência ou a luminescência, após ativação. Quando vários compostos químicos são introduzidos neste sistema, aqueles que podem regular positivamente a atividade do promotor produzirão um sinal de repórter mais elevado. Os compostos que produzem uma elevação significativa na atividade do repórter são assinalados como potenciais activadores do gene A030007L17Rik. Estas moléculas candidatas são seleccionadas para estudos de confirmação adicionais para validar o seu potencial de ativação do gene.

Depois de o rastreio de alto rendimento identificar compostos promissores, o passo seguinte envolve a validação utilizando PCR quantitativo (qPCR). Esta técnica é utilizada para quantificar com precisão os níveis de expressão do ARNm do A030007L17Rik na presença dos activadores químicos. Um aumento dos níveis de ARNm sugere que o produto químico pode ativar o gene a nível transcricional. Para garantir que este aumento do ARNm resulta num aumento correspondente da expressão proteica, é efectuada uma análise Western blot. Esta análise envolve a resolução de proteínas celulares por eletroforese em gel, a sua transferência para uma membrana e a sua posterior sondagem com anticorpos específicos da proteína A030007L17Rik. Um aumento visível nos níveis de proteína detectados, em comparação com controlos não tratados, confirmaria a eficácia do composto na ativação do gene, indicando uma regulação positiva bem sucedida do produto proteico. Estes métodos em conjunto fornecem uma confirmação robusta do papel do químico como ativador, estabelecendo uma ligação direta entre a ativação do gene observada ao nível do mRNA e a produção final da proteína.