9030612M13Rik Ativadores

Os activadores comuns da 9030612M13Rik incluem, entre outros, a forskolina CAS 66575-29-9, a ionomicina CAS 56092-82-1, a PMA CAS 16561-29-8, o cloridrato de isoproterenol CAS 51-30-9 e a histamina, base livre CAS 51-45-6.

9030612M13Rik Activators designa uma categoria de agentes químicos que podem aumentar a atividade do gene 9030612M13Rik. A fase inicial da identificação destes activadores envolve a utilização do rastreio de elevado rendimento (HTS), um método que facilita o exame de uma multiplicidade de compostos quanto à sua capacidade de modular a expressão genética. Isto é conseguido utilizando um ensaio de gene repórter, em que um gene repórter detetável - frequentemente codificando uma proteína fluorescente ou luminescente - é colocado sob o controlo do promotor do gene 9030612M13Rik. Quando as células que albergam esta construção são expostas a vários produtos químicos, aqueles que podem ativar o promotor desencadeiam uma elevação na produção do gene repórter. O aumento resultante da fluorescência ou luminescência é então medido quantitativamente. Os compostos que conduzem consistentemente a um aumento significativo do sinal do repórter são considerados potenciais activadores do gene 9030612M13Rik e são seleccionados para uma análise mais aprofundada para confirmar a sua atividade.

A segunda etapa deste processo consiste em validar a capacidade destes compostos para ativar o gene 9030612M13Rik ao nível do ARNm e da proteína. A PCR quantitativa (qPCR) é utilizada para medir os níveis de ARNm do 9030612M13Rik após a interação com os compostos. Um aumento do ARNm detectado por qPCR é indicativo de uma transcrição elevada, sugerindo que o composto pode aumentar a expressão do gene a nível transcricional. Paralelamente, é utilizada a análise Western blot para determinar se o aumento dos níveis de ARNm se correlaciona com um aumento do produto proteico do gene 9030612M13Rik. Esta técnica envolve a separação de proteínas por eletroforese em gel, a sua transferência para uma membrana e a subsequente sondagem com anticorpos específicos contra a proteína 9030612M13Rik. Um aumento da intensidade da banda proteica, em relação às amostras de controlo, confirmaria que o composto pode efetivamente levar a um aumento do nível proteico.