2500003M10Rik Ativadores

Os activadores comuns 2500003M10Rik incluem, entre outros, galato de (-)-epigalocatequina CAS 989-51-5, LY 294002 CAS 154447-36-6, Wortmannin CAS 19545-26-7, SB 203580 CAS 152121-47-6 e U-0126 CAS 109511-58-2.

No contexto dos activadores do 2500003M10Rik, a metodologia HTS está centrada num sistema de ensaio de repórteres que é sensível à atividade transcricional do gene 2500003M10Rik. Normalmente, um gene repórter, que pode produzir um sinal fluorescente ou luminescente, é colocado sob as sequências reguladoras do gene 2500003M10Rik. Quando um composto da biblioteca rastreada ativa com êxito este promotor, desencadeia a expressão do gene repórter, conduzindo a um sinal detetável. A intensidade deste sinal está correlacionada com a atividade do promotor e, por extensão, com o potencial do composto como ativador. Assim que os potenciais activadores do gene 2500003M10Rik são isolados através de HTS, são submetidos a uma série de ensaios de validação para confirmar a sua atividade. Um dos principais métodos de validação é a reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR), que fornece uma quantificação precisa dos níveis de ARNm do gene 2500003M10Rik após a interação com os compostos.

Um aumento observado nas quantidades de ARNm em comparação com os controlos não tratados indicaria que o composto pode elevar a expressão do gene a nível transcricional. Além disso, para verificar se este aumento do ARNm se traduz na produção de proteínas, é efectuada uma análise Western blot. Esta técnica permite a visualização e a quantificação da proteína específica que o gene 2500003M10Rik codifica. A presença de níveis mais elevados de proteína em células com o composto validaria a função do composto como ativador. Ao integrar dados de qPCR e Western blot, os investigadores podem confirmar que o composto não se limita a aumentar os níveis de ARNm, mas também assegura o aumento da síntese da proteína correspondente. Estes métodos analíticos rigorosos são cruciais para uma avaliação abrangente do efeito do composto na via de expressão do gene, desde a transcrição até à síntese de proteínas, estabelecendo assim um perfil claro das propriedades activadoras do composto no gene 2500003M10Rik.