ZPR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423774-ACT

ZPR1 (proteína de dedo de zinco ZPR1) é uma proteína evolutivamente conservada, que se liga a RNA e contém dedos de zinco, implicada no controlo transcricional, no metabolismo de RNA e na sinalização responsiva a fatores de crescimento. Em células de rato, a ZPR1 participa no tráfego núcleo–citoplasma e associa-se a complexos de processamento de RNA, ligando estímulos mitogénicos a programas de expressão génica que sustentam a proliferação e as respostas ao stress celular. Estudos funcionais relacionam a ZPR1 com a biologia dos neurónios motores e com vias relevantes para a atrofia muscular espinhal, através da sua relação com a montagem de ribonucleoproteínas associadas à SMN e com a dinâmica do splicing de RNA. Assim, a desregulação de redes de regulação de RNA dependentes de ZPR1 é de interesse para a modelação da neurodegeneração e para estudos mecanísticos do acoplamento entre transcrição e processamento de RNA.

ZPR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Zpr1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZPR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Zpr1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Zpr1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZPR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Zpr1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZPR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZPR1 em células tumorais com expressão de Zpr1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.