Plásmido CRISPR de Activación (h) ZnT-1: sc-403094-ACT

SLC30A1 codifica ZnT-1, un transportador de eflujo de zinc localizado predominantemente en la membrana plasmática que mantiene la homeostasis del zinc citosólico al exportar Zn2+ y limitar la toxicidad del zinc intracelular. Al regular los reservorios de zinc lábil, ZnT-1 influye en la señalización dependiente de metales, las respuestas al estrés oxidativo y la actividad de enzimas y factores de transcripción que requieren zinc, afectando así de manera más amplia la proteostasis y las vías adaptativas al estrés. Las alteraciones en el manejo del zinc y en la expresión de SLC30A1 se han vinculado con la susceptibilidad celular a la sobrecarga de metales y al desequilibrio redox, procesos implicados en la neurodegeneración, la inflamación y fenotipos asociados al cáncer. Como regulador clave del flujo de zinc, ZnT-1 se estudia con frecuencia en modelos de estrés por metales, interacción cruzada entre transportadores y vías que acoplan la disponibilidad de micronutrientes con la regulación génica.

ZnT-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC30A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZnT-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC30A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC30A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZnT-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC30A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZnT-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZnT-1 en células tumorales con expresión de SLC30A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.