ZEB1 Double Nickase Plasmid (m): sc-423302-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ZEB1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ZEB1 Double-Nickase-Plasmid (m) und ZEB1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Zeb1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ZEB1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423302-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZEB1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423302-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Zeb1 kodiert das Zinkfinger‑E‑Box‑bindende Homeobox‑Protein 1 (ZEB1), einen sequenzspezifischen Transkriptionsfaktor, der an E‑Box‑Motive bindet und so die epitheliale–mesenchymale Transition (EMT), die Zellpolarität und die Linienplastizität koordiniert. In Mausmodellen integriert ZEB1 TGF‑β/SMAD‑Signale und reguliert MikroRNA‑Netzwerke wie die miR‑200‑Familie wechselseitig, wodurch Transkriptionsprogramme umgestaltet werden, die Adhäsion, Migration und Differenzierung steuern. ZEB1 beeinflusst Chromatin und Transkription über Interaktionen mit Korepressoren einschließlich CtBP und weiteren epigenetischen Regulatoren und verknüpft so entwicklungsbiologische Signale mit stabilen Zuständen der Genexpression. Eine fehlregulierte ZEB1‑Aktivität ist in krankheitsrelevanten Modellen mit aberranten EMT‑ähnlichen Programmen und veränderter Differenzierung assoziiert, was ZEB1 zu einem häufigen Ziel mechanistischer Studien zu Invasion, Fibrose und Signalwegen der Tumorprogression macht.
ZEB1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Zeb1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Zeb1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Zeb1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Zeb1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.