ZDHHC2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403195-ACT

ZDHHC2 codifica uma palmitoiltransferase da família DHHC que catalisa a S-palmitoilação de proteínas-alvo, modulando a sua associação à membrana, estabilidade, tráfego e capacidade de sinalização. Por meio de ciclos dinâmicos de palmitoilação, a ZDHHC2 contribui para a regulação do transporte vesicular, da sinalização sináptica e relacionada ao sistema imune, e da organização de microdomínios de membrana que influenciam a atividade de vias a jusante. Alterações na atividade da ZDHHC2 e na homeostase da palmitoilação têm sido associadas a redes de sinalização celular desreguladas implicadas na biologia do câncer e em processos neurológicos, tornando-a um ponto de partida útil para estudar como modificações lipídicas ajustam a função proteica. Como uma enzima humana que atua em membranas, a ZDHHC2 é frequentemente investigada em conjunto com a maquinaria de palmitoilação/despalmitoilação e com substratos específicos de vias, para mapear as consequências funcionais da lipidação pós-traducional.

ZDHHC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZDHHC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZDHHC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZDHHC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZDHHC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZDHHC2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZDHHC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZDHHC2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZDHHC2 em células tumorais com expressão de ZDHHC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.