ZBTB4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404975

Panoramica

ZBTB4 (proteina 4 contenente dita di zinco e dominio BTB) è un regolatore trascrizionale specifico per sequenza che si lega al DNA CpG metilato e contribuisce al controllo epigenetico dell’espressione genica. Attraverso il suo dominio BTB/POZ e i motivi a dita di zinco, ZBTB4 partecipa a programmi di repressione associati alla cromatina che influenzano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e stati trascrizionali legati alla differenziazione. Un’alterata espressione o attività di ZBTB4 è stata associata a proliferazione disregolata e fenotipi invasivi in molteplici contesti tumorali, in linea con un ruolo nel mantenimento dell’omeostasi trascrizionale. In quanto fattore sensibile alla metilazione, ZBTB4 è inoltre rilevante per studi che collegano i pattern di metilazione del DNA agli output trascrizionali a valle e alla stabilità del genoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZBTB4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZBTB4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZBTB4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZBTB4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZBTB4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZBTB4 per lo studio della segnalazione di ZBTB4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZBTB4 critici per la funzione di ZBTB4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZBTB4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZBTB4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZBTB4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZBTB4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZBTB4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZBTB4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZBTB4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZBTB4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.