ZBTB4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404975

Übersicht

ZBTB4 (Zinkfinger- und BTB-Domänen-enthaltendes Protein 4) ist ein sequenzspezifischer Transkriptionsregulator, der an methyliertes CpG-DNA bindet und zur epigenetischen Kontrolle der Genexpression beiträgt. Über seine BTB/POZ-Domäne und Zinkfinger-Motive ist ZBTB4 an chromatinassoziierten Repressionsprogrammen beteiligt, die den Zellzyklus, DNA-Schadensantworten und differenzierungsassoziierte Transkriptionszustände beeinflussen. Eine veränderte Expression oder Aktivität von ZBTB4 wurde in verschiedenen Krebszusammenhängen mit dysregulierter Proliferation und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht, was mit einer Rolle bei der Aufrechterhaltung der transkriptionellen Homöostase vereinbar ist. Als methylierungssensitiver Faktor ist ZBTB4 zudem relevant für Studien, die DNA-Methylierungsmuster mit nachgeschalteten transkriptionellen Outputs und der Genomstabilität verknüpfen.

Das ZBTB4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZBTB4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZBTB4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZBTB4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZBTB4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZBTB4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZBTB4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZBTB4-Exone abzielen, die für die ZBTB4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZBTB4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZBTB4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZBTB4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZBTB4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZBTB4 HDR-Plasmid (h) und ZBTB4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZBTB4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZBTB4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.