Zap-70 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423755

Panoramica

Zap70 codifica la tirosin-chinasi citosolica ZAP-70, un mediatore chiave della segnalazione a valle del recettore dei linfociti T (TCR) e del complesso CD3, che collega il riconoscimento dell’antigene alle cascate intracellulari di fosforilazione. In seguito all’ingaggio del TCR, ZAP-70 viene reclutata sugli ITAM fosforilati delle catene CD3 e propaga il segnale attraverso gli scaffold LAT/SLP-76, promuovendo l’attivazione di PLCγ1, il flusso di calcio, la segnalazione MAPK e i programmi trascrizionali mediati da NFAT/NF-κB/AP-1. Nell’immunologia murina, Zap70 è essenziale per la selezione timocitaria, la maturazione dei linfociti T e le risposte effettrici, risultando quindi centrale negli studi sull’immunità adattativa e sulle reti di segnalazione linfocitaria. Un’attività deregolata della via di ZAP-70 è rilevante nei modelli di immunodeficienza, autoimmunità e biologia delle neoplasie linfoidi, in cui soglie di segnalazione alterate influenzano sviluppo e attivazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Zap-70 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Zap70 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Zap70 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Zap70 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Zap-70.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Zap70 per lo studio della segnalazione di Zap-70, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Zap70 critici per la funzione di Zap-70
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Zap70 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Zap-70 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Zap-70 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Zap70. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Zap-70 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Zap-70 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Zap70 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Zap70 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.