XRCC2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403531

Panoramica

XRCC2 codifica un paralogo di RAD51 che svolge una funzione nella riparazione per ricombinazione omologa (HR) delle rotture a doppio filamento del DNA, supportando l’assemblaggio e la stabilizzazione del filamento di RAD51 durante l’invasione del filamento. Questa proteina è essenziale per mantenere l’integrità della forcella di replicazione e per risolvere il danno al DNA che deriva dallo stress replicativo, con strette connessioni funzionali con la via dell’anemia di Fanconi e con reti più ampie di mantenimento del genoma. L’alterazione di XRCC2 compromette la capacità di HR, aumenta l’instabilità cromosomica e incrementa la sensibilità agli agenti che inducono crosslink del DNA, collegando la disfunzione di XRCC2 alla predisposizione al cancro e a fenotipi correlati di deficit nei meccanismi di riparazione del DNA. In quanto fattore centrale dell’HR, XRCC2 è spesso studiato nei meccanismi di stabilità del genoma, nei processi mutazionali e nella segnalazione della risposta al danno al DNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO XRCC2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene XRCC2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del XRCC2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto XRCC2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina XRCC2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di XRCC2 per lo studio della segnalazione di XRCC2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni XRCC2 critici per la funzione di XRCC2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di XRCC2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal XRCC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal XRCC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus XRCC2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal XRCC2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR XRCC2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia XRCC2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio XRCC2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.