Plasmide Double Nickase (h) Wolframin: sc-403869-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Wolframin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Wolframin Double Nickase (h) et le plasmide Wolframin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant WFS1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Wolframin | sc-403869-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Wolframin | sc-403869-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WFS1 code la wolframine, une protéine membranaire multipasse du réticulum endoplasmique (RE) qui contribue à l’homéostasie du RE et protège les cellules d’une signalisation inadaptée de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) lors de stress sécrétoires et métaboliques. La wolframine participe à des processus liés à la gestion du Ca²⁺ dans le RE, à la protéostasie et au dialogue entre les voies de stress du RE et la fonction mitochondriale, influençant la survie cellulaire et la capacité de sécrétion d’insuline. La dérégulation de WFS1 est associée au syndrome de Wolfram et a été impliquée dans des phénotypes plus larges de neurodégénérescence et de diabète, ce qui en fait un nœud utile pour l’étude des réseaux de signalisation sensibles au stress. Dans des modèles de cellules humaines, la perturbation de WFS1 fournit un indicateur des marqueurs de stress du RE/UPR, de la signalisation dépendante du calcium et des effets en aval sur le métabolisme et le devenir cellulaire.
Wolframin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus WFS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de WFS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de WFS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de WFS1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.