WISP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402559-ACT

WISP1 codifica a WISP-1 (proteína 1 da via de sinalização induzível por WNT1/CCN4), uma proteína matricelular secretada que modula as interações célula–matriz, a adesão e a migração. Como membro da família CCN, a WISP-1 integra a remodelação da matriz extracelular com a sinalização de fatores de crescimento e de integrinas, sendo frequentemente estudada no contexto de programas transcricionais dirigidos por Wnt/β-catenina. Entre as funções descritas estão a regulação da ativação de fibroblastos, processos osteogênicos e condrogênicos e a sinalização de sobrevivência em compartimentos estromais e epiteliais. Alterações na expressão de WISP1 têm sido associadas à fibrose tecidual, ao reparo anômalo de feridas e à remodelação do microambiente tumoral, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de invasão, angiogênese e dinâmica da matriz extracelular.

WISP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WISP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WISP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WISP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WISP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WISP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WISP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WISP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WISP-1 em células tumorais com expressão de WISP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.