Partículas Lentivirales de Activación (m) Waf1/Cip1/CDKN1A p21: sc-419607-LAC

El gen murino Cdkn1a codifica el inhibidor de quinasas dependientes de ciclina p21 (Waf1/Cip1), un efector clave de las respuestas al estrés dependientes de p53 que frena la progresión del ciclo celular impulsada por CDK2 y CDK4/6 en el punto de control G1/S. Al modular directamente la actividad de los complejos ciclina–CDK y los procesos de replicación y reparación del ADN asociados al antígeno nuclear de células en proliferación (PCNA), p21 integra señales de daño en el ADN, estrés oxidativo y activación de oncogenes para coordinar la detención del ciclo celular, la senescencia y la apoptosis dependiente del contexto. Por ello, Cdkn1a es central en las vías que regulan la estabilidad del genoma y la homeostasis tisular, y su desregulación se utiliza ampliamente como lectura molecular en estudios de señalización de supresores tumorales, remodelación tisular asociada a la inflamación y senescencia celular relacionada con el envejecimiento en modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral Waf1/Cip1/CDKN1A p21 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Cdkn1a en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Waf1/Cip1/CDKN1A p21 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Cdkn1a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Waf1/Cip1/CDKN1A p21. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Cdkn1a y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.