Plasmide Double Nickase (m) Waf1/Cip1/CDKN1A p21: sc-419607-NIC

Cdkn1a code l’inhibiteur de kinase dépendante des cyclines p21 (Waf1/Cip1), un effecteur majeur des réponses aux dommages de l’ADN et au stress, qui freine l’activité des CDK afin d’assurer l’application des points de contrôle du cycle cellulaire en G1/S et en G2/M. p21 est régulé transcriptionnellement par p53 et intègre des signaux issus des voies dépendantes d’ATM/ATR, coordonnant l’arrêt du cycle cellulaire, la réparation de l’ADN et des programmes de sénescence dépendant du contexte. En modulant les complexes cycline–CDK et via son interaction avec PCNA, p21 influence la dynamique de réplication et la stabilité du génome. Une dérégulation de la signalisation Cdkn1a/p21 est impliquée dans la tumorigenèse, le vieillissement tissulaire et le remodelage associé à l’inflammation, ce qui en fait un nœud fréquent dans les études du contrôle de la prolifération et de l’adaptation au stress dans des modèles murins.

Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cdkn1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cdkn1a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cdkn1a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cdkn1a.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.