Plásmido Doble Nickase (h) Waf1/Cip1/CDKN1A p21: sc-400013-NIC

CDKN1A codifica p21 (Waf1/Cip1), un inhibidor de quinasas dependientes de ciclina que integra señales de estrés para frenar la progresión del ciclo celular en el punto de control G1/S. Inducida de forma destacada por p53 en respuesta al daño del ADN, p21 inhibe complejos asociados a CDK2 y CDK1 y modula la replicación y la reparación del ADN dependientes de PCNA. A través de estas interacciones, p21 influye en la senescencia, el arresto transitorio del ciclo celular y las decisiones sobre el destino celular durante el estrés genotóxico. La desregulación de la señalización CDKN1A/p21 se implica con frecuencia en la transformación oncogénica y en la alteración de vías supresoras de tumores, y también es relevante para procesos como la tolerancia al estrés de replicación y modelos de senescencia inducida por terapias.

Waf1/Cip1/CDKN1A p21 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDKN1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDKN1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDKN1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDKN1A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.