Plasmide Double Nickase (h) VPRBP: sc-403283-NIC

DCAF1 code pour VPRBP, un récepteur de substrats du complexe ligase E3 d’ubiquitine CUL4–DDB1, qui contribue à orienter l’ubiquitination et la dégradation protéasomale de cibles protéiques spécifiques. En régulant la stabilité des protéines, VPRBP participe au contrôle de la progression du cycle cellulaire, des réponses aux dommages de l’ADN et de processus associés à la chromatine qui influencent les programmes transcriptionnels. VPRBP a également été impliquée dans des réseaux de signalisation comprenant la régulation des kinases et le contrôle des points de contrôle, ce qui en fait une cible d’intérêt pour l’étude de l’intégrité du génome et du stress prolifératif. La dérégulation de l’activité CUL4–DDB1–DCAF1 a été associée à une protéostasie altérée dans des contextes liés au cancer ainsi que dans d’autres troubles où la régulation médiée par l’ubiquitine est perturbée.

VPRBP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DCAF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DCAF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DCAF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DCAF1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.