Plásmido Doble Nickase (h) vinculin: sc-400227-NIC

VCL codifica la vinculina, un adaptador del citoesqueleto que acopla las integrinas y las cadherinas a la red de actina en las adhesiones focales y las uniones adherentes, estabilizando los contactos célula–matriz y célula–célula. La vinculina participa en la mecanotransducción al responder a fuerzas de tracción y coordinar el ensamblaje de complejos de adhesión, influyendo en el extendido celular, la tracción y la migración. A través de interacciones con talina, paxilina, α-actinina y F-actina, integra vías de señalización vinculadas a las GTPasas de la familia Rho, la remodelación de actina y el recambio de adhesiones. La alteración de la expresión de VCL o de la dinámica de adhesión se ha asociado con una integridad tisular deficiente y fenotipos de remodelación, y se estudia con frecuencia en contextos como la invasión de células cancerosas, la estructura de los cardiomiocitos y las respuestas de la matriz extracelular relacionadas con la fibrosis.

vinculin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus VCL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de VCL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de VCL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con VCL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.