Veli2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423668

概要

Lin7bはVeli2をコードしており、Veli2はMAGUK/LIN7ファミリーに属する膜関連の足場タンパク質で、基底外側極性複合体の編成を助け、膜タンパク質輸送の安定化に寄与します。Veli2は、PDZドメインをもつ相互作用パートナーとの結合を介して、接着結合およびシナプスのタンパク質ネットワークの組み立てに関与し、上皮の極性、神経シグナル伝達、ならびに小胞輸送に影響を与えます。マウス系では、LIN7関連複合体の破綻により、細胞間接着、受容体の局在、興奮性シナプスの構築が乱れる可能性があり、これらの過程は神経発達およびバリア機能モデルで頻繁に解析対象となります。極性および輸送経路の変調は、発生表現型や、組織構築および神経回路連結性の疾患関連の破綻を支える機序と広く関係しています。

Veli2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLin7b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lin7b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lin7bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Veli2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Veli2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lin7b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Veli2の機能に不可欠なLin7bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lin7bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Veli2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVeli2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lin7b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Veli2 HDRプラスミド（m）および Veli2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLin7bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLin7b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。