Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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VAT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405997
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- VAT1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico VAT1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: VAT1 Antibody (E-7): sc-515705
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
VAT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405997 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
VAT1 (vesicle amine transport 1) codifica una proteina periferica di membrana conservata, arricchita nei tessuti neuronali e secretori, dove si associa alle vescicole sinaptiche e a quelle a nucleo denso. VAT1 è stata collegata alla biogenesi e al traffico delle vescicole, sostenendo i processi regolati di esocitosi ed endocitosi che modulano il rilascio di neurotrasmettitori e ormoni. Attraverso questi ruoli, VAT1 si connette a vie che governano la dinamica di membrana, le interazioni proteiche associate al redox e le risposte allo stress cellulare nelle cellule altamente secretorie. Un’alterata espressione di VAT1 è stata riportata in studi sulla neurodegenerazione, su fenotipi associati al cancro e su disfunzioni metaboliche, rendendola un nodo utile per l’indagine meccanicistica della segnalazione dipendente dalle vescicole.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VAT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VAT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VAT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VAT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VAT1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VAT1 per lo studio della segnalazione di VAT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni VAT1 critici per la funzione di VAT1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VAT1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal VAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VAT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal VAT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VAT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VAT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VAT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.