UVRAG CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402956-ACT

ヒトUVRAG（UV radiation resistance associated gene）は、オートファジーおよびエンドリソソーム輸送を多面的に制御する因子をコードしており、ストレス下での細胞恒常性の維持を支えます。UVRAGはクラスIII PI3K複合体と相互作用してオートファゴソームの成熟やオートファゴソーム‐リソソーム融合を促進するほか、テザリング／融合装置との相互作用を介してエンドサイトーシス輸送や小胞動態にも寄与します。分解系にとどまらず、UVRAGはゲノム安定性の維持や損傷応答の協調にも関与するとされ、小胞輸送系を細胞生存プログラムと結び付けています。UVRAG関連プロセスの破綻は、オートファジーや膜輸送の変化が代謝、炎症、プロテオスタシスを再編し得ることから、腫瘍生物学、神経変性、感染モデルの文脈で頻繁に研究されています。

UVRAG CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UVRAGの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UVRAG CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UVRAG 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUVRAG転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UVRAGの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUVRAG遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUVRAG依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUVRAG発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUVRAG経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。