UTX Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402761-ACT

O KDM6A humano codifica a UTX, uma desmetilase de histonas que contém um domínio Jumonji C (JmjC) e catalisa a remoção de H3K27me3, antagonizando a repressão mediada por Polycomb para promover competência transcricional. A UTX atua em redes de remodelamento de cromatina, incluindo o acoplamento funcional à metilação de H3K4 associada ao COMPASS/MLL e a regulação de programas gênicos que especificam linhagens celulares. Por meio dessas atividades, o KDM6A influencia o controle do ciclo celular, a diferenciação e a manutenção do estado epigenético em múltiplos tipos celulares. Alterações na função de KDM6A/UTX são frequentemente estudadas no contexto de paisagens epigenéticas desreguladas observadas na biologia do câncer e em distúrbios do desenvolvimento.

UTX O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KDM6A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UTX O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KDM6A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KDM6A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UTX. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KDM6A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UTX no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UTX em células tumorais com expressão de KDM6A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.