utrophin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-400522-KO-2

概要

UTRNはユートロフィンをコードする遺伝子であり、ユートロフィンは大型の細胞骨格リンカータンパク質です。ユートロフィンは、アクチン細胞骨格をサルコレマおよび他の膜ドメインに存在するジストロフィン関連糖タンパク質複合体に結び付けます。ユートロフィンは膜の安定性、メカノトランスダクション、ならびに細胞‐マトリックス接着構造の編成に寄与し、横紋筋およびその他の組織におけるシグナル伝達と構造的完全性を支えます。スペクトリン様リピートや相互作用界面を介して、ユートロフィンは細胞骨格のリモデリングや膜関連スキャフォールディング過程の調整にも関与します。UTRNの制御異常や代償的なユートロフィン発現は、筋ジストロフィーの生物学および関連する膜脆弱性表現型の文脈で広く研究されています。

utrophin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるUTRN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UTRN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UTRNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、utrophinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、utrophinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UTRN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• utrophinの機能に不可欠なUTRNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UTRNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• utrophin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびutrophin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UTRN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  utrophin HDRプラスミド（h）および utrophin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUTRNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUTRN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。