UFM1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-416900-LAC

UFM1 kodiert Ubiquitin-Fold-Modifier 1, ein ubiquitinähnliches Protein, das im Rahmen der UFMylierungs-Kaskade an Substrate konjugiert wird. An dieser Kaskade sind UBA5, UFC1 und die E3-Ligase UFL1 beteiligt; die Umkehrreaktion erfolgt durch UFSP-Proteasen. Dieser Signalweg reguliert die Proteostase im endoplasmatischen Retikulum, die ribosomenassoziierte Qualitätskontrolle und die zelluläre Anpassung an Stress und ist mit Prozessen wie Proteintranslation, Autophagie und inflammatorischer Signalübertragung verknüpft. UFM1-abhängige Modifikationen wurden mit der Aufrechterhaltung der Funktion des sekretorischen Weges und dem Zellüberleben unter ER-Stress in Zusammenhang gebracht, was sie für mechanistische Studien zu proteotoxischem Stress und Gewebehomöostase relevant macht. Eine Fehlregulation von Komponenten der UFMylierung wurde mit neurodevelopmentalen Phänotypen, hämatopoetischen Defekten und krebsassoziierten Signalwegen assoziiert, was die Untersuchung von UFM1 in krankheitsrelevanten Zellmodellen unterstützt.

UFM1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente UFM1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

UFM1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der UFM1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen UFM1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen UFM1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.