Plasmide Double Nickase (h) UDP-GlcDH: sc-405002-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) UDP-GlcDH correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide UDP-GlcDH Double Nickase (h) et le plasmide UDP-GlcDH Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant UGDH. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: UDP-GlcDH Antibody (B-4): sc-137058
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) UDP-GlcDH | sc-405002-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) UDP-GlcDH | sc-405002-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’UGDH humaine code l’UDP‑glucose 6‑déshydrogénase (UDP‑GlcDH), une enzyme cytosolique qui oxyde l’UDP‑glucose en UDP‑acide glucuronique, un précurseur central de la biosynthèse des glycosaminoglycanes et des protéoglycanes. En contrôlant la disponibilité de l’UDP‑acide glucuronique, l’UDP‑GlcDH contribue à réguler la composition de la matrice extracellulaire, l’architecture du glycocalyx et les interactions cellule‑cellule / cellule‑matrice qui influencent l’adhérence, la migration et la mécanotransduction. L’activité d’UGDH s’articule avec le métabolisme des glucides et les voies d’interconversion des sucres nucléotidiques qui soutiennent les programmes de glycosylation au cours du développement et du remodelage tissulaire. Une expression d’UGDH dérégulée ou une altération du flux d’UDP‑acide glucuronique peut modifier la production d’hyaluronane et de GAG sulfatés, reliant cet axe à la fibrose, à la signalisation inflammatoire et à la reprogrammation de la matrice associée au cancer dans des systèmes expérimentaux.
UDP-GlcDH Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UGDH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UGDH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UGDH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UGDH.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.