Plasmide Double Nickase (h) UBE1L2: sc-412489-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) UBE1L2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide UBE1L2 Double Nickase (h) et le plasmide UBE1L2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant UBA6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) UBE1L2 | sc-412489-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) UBE1L2 | sc-412489-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBA6 code l’enzyme E1 d’activation de l’ubiquitine UBE1L2, qui initie la conjugaison de l’ubiquitine et des protéines ubiquitine‑like en adénylant l’ubiquitine puis en la transférant à des enzymes E2 afin de soutenir la modification des substrats médiée en aval par les ligases E3. Cette activité contribue à coordonner la protéostasie dépendante de l’ubiquitine, le contrôle qualité des protéines et le renouvellement régulé de facteurs de signalisation, influençant ainsi la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et la signalisation de l’immunité innée. UBA6 est également liée à la voie FAT10/UBD via l’activation de modificateurs de type ubiquitine qui façonnent le traitement des antigènes et la signalisation inflammatoire. La dérégulation des cascades d’activation et de conjugaison de l’ubiquitine est largement pertinente pour les mécanismes à l’origine de la neurodégénérescence, du remodelage des voies de signalisation associé au cancer et de la biologie des maladies inflammatoires, faisant d’UBA6 une cible utile pour disséquer les dépendances aux voies de l’ubiquitine.
UBE1L2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UBA6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UBA6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UBA6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UBA6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.