TWIK-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407263-NIC

ヒトKCNK6は、二孔型カリウム（K2P）チャネルであるTWIK-2をコードしており、背景K+コンダクタンスに寄与して、静止膜電位および膜興奮性の設定に関与する。イオン恒常性を形成することで、TWIK-2は興奮性細胞・非興奮性細胞の両方において、刺激―分泌共役、細胞体積調節、ならびにCa2+依存性シグナル伝達過程に影響を及ぼす。K2Pチャネル活性の変化は、血管トーヌスの異常、炎症性シグナル伝達の破綻、増殖関連表現型と関連づけられており、KCNK6は心代謝および免疫関連経路におけるイオンチャネルの寄与を機構的に研究する上で重要な標的である。TWIK-2の機能は、一般に電気生理学的指標、細胞内シグナル動態、ならびに経路レベルの摂動解析の文脈で検討される。

TWIK-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KCNK6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KCNK6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KCNK6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KCNK6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。