TWEAK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401202

Panoramica

TNFSF12 codifica la citochina TWEAK (TNF-like weak inducer of apoptosis), una proteina transmembrana di tipo II che può essere rilasciata come ligando solubile e segnala principalmente attraverso il recettore FN14/TNFRSF12A. L’interazione TWEAK–FN14 modula l’attività delle vie NF-κB e MAPK, influenzando sopravvivenza, proliferazione, migrazione e differenziamento cellulare, nonché l’espressione di geni infiammatori, con effetti dipendenti dal contesto su apoptosi e rimodellamento tissutale. Questo asse è implicato nella regolazione di programmi angiogenici e fibrotici, oltre che nel reclutamento di cellule immunitarie e nelle reti citochiniche all’interno di tessuti danneggiati o sottoposti a stress. Una segnalazione TWEAK/FN14 deregolata è stata associata a processi patologici infiammatori e autoimmuni, a fenomeni neuroinfiammatori e al rimodellamento del microambiente tumorale, a supporto di studi meccanicistici in immunologia e biologia del cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TWEAK (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TNFSF12 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TNFSF12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TNFSF12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TWEAK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TNFSF12 per lo studio della segnalazione di TWEAK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TNFSF12 critici per la funzione di TWEAK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TNFSF12 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TWEAK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TWEAK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TNFSF12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TWEAK Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TWEAK (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TNFSF12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TNFSF12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.