TUTase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406803

Panoramica

Il gene umano **TUT1** codifica la **terminal uridylyltransferase 1 (TUTase)**, una polimerasi dell’RNA non canonica che catalizza l’**uridilazione al 3′** di diversi substrati di RNA. Modellando la struttura dell’estremità 3′ dell’RNA, la TUTase contribuisce alla maturazione e al turnover dell’RNA, influenzando il metabolismo degli snRNA spliceosomiali e, più in generale, la regolazione genica post-trascrizionale. L’uridilazione dipendente da TUT1 si interfaccia con le vie di controllo qualità dell’RNA che regolano la stabilità dei piccoli RNA e di specifiche popolazioni di mRNA. Programmi di aggiunta di code all’RNA e di degradazione che coinvolgono TUT1, quando deregolati, sono stati associati a stati di espressione genica alterati osservati nel cancro e in altri disturbi caratterizzati da un processamento dell’RNA compromesso.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TUTase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TUT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TUT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TUT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TUTase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TUT1 per lo studio della segnalazione di TUTase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TUT1 critici per la funzione di TUTase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TUT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TUTase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TUTase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TUT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TUTase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TUTase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TUT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TUT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.