TUTase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406803

概要

ヒトTUT1は、非典型的なRNAポリメラーゼであるターミナル・ウリジリル転移酵素1（TUTase）をコードしており、多様なRNA基質の3′末端ウリジル化を触媒します。RNAの3′末端構造を形成することで、TUTaseはRNAの成熟と分解（ターンオーバー）に寄与し、スプライソソームsnRNAの代謝や、より広範な転写後遺伝子発現制御に影響を与えます。TUT1依存的なウリジル化は、小分子RNAや一部のmRNA集団の安定性を制御するRNA品質管理経路と連動しています。TUT1が関与するRNAテーリングおよび分解プログラムの異常は、がんやRNAプロセシングが攪乱されるその他の疾患で観察される遺伝子発現状態の変化と関連づけられています。

TUTase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTUT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TUT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TUT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TUTaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TUTaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TUT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TUTaseの機能に不可欠なTUT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TUT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TUTase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTUTase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TUT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TUTase HDRプラスミド（h）および TUTase HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTUT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTUT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。