Plásmido CRISPR de Activación (h) TSHZ3: sc-410072-ACT

TSHZ3 (teashirt zinc finger homeobox 3) codifica un factor de transcripción nuclear caracterizado por dominios de dedos de zinc C2H2 que regulan programas de expresión génica durante el desarrollo y la especificación de tipos celulares. En tejidos humanos, TSHZ3 contribuye al control transcripcional de procesos de diferenciación y patrón, integrándose en redes reguladoras génicas más amplias que determinan la identidad de linaje y la organogénesis. La desregulación de la expresión o la función de TSHZ3 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con una formación de circuitos alterada, lo que la hace relevante para estudios del control transcripcional en linajes neuronales y mesenquimales. Como regulador que se une al ADN, TSHZ3 se investiga con frecuencia en vías que influyen en la morfogénesis, el desarrollo sináptico y las decisiones de destino celular.

TSHZ3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TSHZ3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TSHZ3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TSHZ3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TSHZ3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TSHZ3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TSHZ3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TSHZ3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TSHZ3 en células tumorales con expresión de TSHZ3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.