TRPC5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423516

Descripción general

Trpc5 codifica TRPC5, un canal catiónico no selectivo de la familia de canales TRP canónicos (transient receptor potential canonical) que media la entrada de Ca²⁺ en respuesta a señales dependientes de receptores y de lípidos. TRPC5 participa en vías dependientes de PLC aguas abajo de GPCR y de receptores tirosina quinasa, modulando la excitabilidad de membrana, la homeostasis del calcio intracelular y programas de transcripción dependientes de calcio. En sistemas murinos, TRPC5 se estudia ampliamente en neuronas y en contextos vasculares/endoteliales, donde influye en la función sináptica, la dinámica de las neuritas, las respuestas mecanosensibles y la señalización sensible al estado redox. La actividad desregulada de TRPC5 se ha vinculado con procesos relevantes para la señalización del dolor, conductas tipo ansiedad, el remodelado vascular y mecanismos de lesión renal, lo que respalda su uso en modelos de neurobiología, biología cardiovascular y fisiopatología renal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRPC5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Trpc5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Trpc5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Trpc5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRPC5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Trpc5 para la investigación de la señalización de TRPC5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Trpc5 críticos para la función de TRPC5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Trpc5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TRPC5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TRPC5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Trpc5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRPC5 (m) y el plásmido HDR TRPC5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Trpc5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Trpc5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.