TRPC5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423516

概要

Trpc5 は、受容体作動性および脂質依存性シグナルに応答して Ca²⁺流入を媒介する、一過性受容体電位（TRP）カノニカル（canonical）ファミリーに属する非選択性陽イオンチャネル TRPC5 をコードします。TRPC5 は、GPCR や受容体型チロシンキナーゼの下流にある PLC 依存性経路に関与し、膜興奮性、細胞内カルシウム恒常性、ならびにカルシウム依存的な転写プログラムを調節します。マウス系では、TRPC5 は主に神経系および血管／内皮の文脈で広く研究されており、シナプス機能、神経突起動態、機械刺激感受性応答、酸化還元感受性シグナル伝達などに影響します。TRPC5 活性の破綻（異常）は、疼痛シグナル、 不安様行動、血管リモデリング、腎障害の機序に関連する過程と結び付けられており、神経生物学、心血管生物学、腎病態生理のモデルにおける標的としての有用性を支持します。

TRPC5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTrpc5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Trpc5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Trpc5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRPC5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRPC5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Trpc5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRPC5の機能に不可欠なTrpc5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Trpc5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRPC5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTRPC5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Trpc5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRPC5 HDRプラスミド（m）および TRPC5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTrpc5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTrpc5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。