TRPC4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423515

Visão geral

Trpc4 codifica o TRPC4, um canal catiônico não seletivo da família TRP canônica que medeia a entrada de Ca²⁺ operada por receptor e operada por depleção de estoques (store-operated) a jusante da sinalização por GPCR e PLC. O influxo de Ca²⁺ dependente de TRPC4 contribui para a despolarização da membrana e para programas de transcrição dependentes de cálcio, influenciando processos como a regulação da barreira endotelial, a contratilidade do músculo liso e a excitabilidade neuronal. Em sistemas murinos, a atividade de TRPC4 é comumente estudada em vias que controlam o tônus e a permeabilidade vasculares, a motilidade do trato gastrointestinal e urinário e a sinalização sináptica. A desregulação da homeostase de cálcio ligada ao TRPC4 tem sido associada a fenótipos relevantes para pesquisas cardiovasculares, inflamatórias e neurocomportamentais, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de sinalização e fisiologia.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TRPC4 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Trpc4 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Trpc4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Trpc4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TRPC4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Trpc4 para a investigação da sinalização de TRPC4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Trpc4 críticos para a função TRPC4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Trpc4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TRPC4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TRPC4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Trpc4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TRPC4 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TRPC4 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Trpc4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Trpc4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.