TRPC4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423515

概要

Trpc4 は、カノニカルTRPファミリーに属する非選択性カチオンチャネルである TRPC4 をコードしており、GPCRおよびPLCシグナル伝達の下流で、受容体作動性およびストア作動性の Ca²⁺流入を担います。TRPC4 依存的な Ca²⁺流入は、膜の脱分極やカルシウム依存性の転写プログラムに寄与し、内皮バリア機能の制御、平滑筋収縮、神経細胞の興奮性などの過程に影響します。マウス系では、TRPC4 活性は血管トーンや血管透過性を制御する経路、消化管および尿路の運動、シナプスシグナル伝達に関わる経路において、一般的に研究されています。TRPC4 に関連するカルシウム恒常性の破綻は、心血管、炎症、神経行動研究に関連する表現型と関連付けられており、シグナル伝達および生理機能研究における機序解明の要所（メカニスティック・ノード）としての有用性を支持しています。

TRPC4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTrpc4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Trpc4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Trpc4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRPC4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRPC4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Trpc4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRPC4の機能に不可欠なTrpc4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Trpc4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRPC4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTRPC4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Trpc4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRPC4 HDRプラスミド（m）および TRPC4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTrpc4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTrpc4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。