Plásmido CRISPR de Activación (h) TRP1: sc-400412-ACT

El gen humano **TYRP1** codifica la proteína 1 relacionada con la tirosinasa (TRP1), una glicoproteína enzimática de membrana localizada en el melanosoma que favorece la síntesis de eumelanina y la maduración del melanosoma en células productoras de pigmento. TRP1 actúa dentro de la red de melanogénesis junto con **TYR** y **DCT**, influyendo en la química oxidativa de los intermediarios de la melanina, la estabilidad del melanosoma y los fenotipos de pigmentación regulados por vías como la señalización de **MITF**. Las alteraciones en la expresión de **TYRP1** o sus variantes se asocian con trastornos de la pigmentación y se han estudiado en el contexto de la biología del melanoma, donde los cambios en la actividad de la vía de la melanina pueden afectar las respuestas al estrés celular y los estados de diferenciación. Como marcador melanocítico ligado al linaje, **TYRP1** se utiliza con frecuencia para investigar la biogénesis del melanosoma, el metabolismo del pigmento y los programas transcripcionales que gobiernan la función del melanocito.

TRP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TYRP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TYRP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TYRP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TYRP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRP1 en células tumorales con expresión de TYRP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.