TRMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410018

Übersicht

TRMT1 kodiert die tRNA‑Methyltransferase 1, ein RNA‑modifizierendes Enzym, das die Bildung von N2,N2‑Dimethylguanosin (m2,2G) an Position 26 in mehreren zytosolischen tRNAs katalysiert. Diese Modifikation unterstützt die korrekte tRNA‑Faltung und die Genauigkeit der Decodierung und beeinflusst damit die globale Translationseffizienz und die Proteostase. Die TRMT1‑Aktivität verbindet epitranskriptomische Regulation von RNA mit zellulären Stressantworten und wirkt sich nachgeschaltet auf Programme der Proteinsynthese während Wachstum und Differenzierung aus. Eine veränderte TRMT1‑Funktion wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was TRMT1 zu einem nützlichen Ziel macht, um zu untersuchen, wie die Dynamik von tRNA‑Modifikationen die neuronale sowie stressadaptive Genexpression prägt.

Das TRMT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRMT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRMT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRMT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRMT1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRMT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRMT1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRMT1-Exone abzielen, die für die TRMT1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRMT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRMT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TRMT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRMT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRMT1 HDR-Plasmid (h) und TRMT1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRMT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRMT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.