Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TRMT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410018
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRMT1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TRMT1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRMT1 Antibody (G-3): sc-373687
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRMT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-410018 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
TRMT1 codifica la tRNA metiltransferasi 1, un enzima che modifica l’RNA e catalizza la formazione di N2,N2-dimetilguanosina (m2,2G) alla posizione 26 in diversi tRNA citosolici. Questa modifica favorisce il corretto ripiegamento del tRNA e l’accuratezza della decodifica, influenzando così l’efficienza traduttiva globale e la proteostasi. L’attività di TRMT1 collega la regolazione epitranscrittomica dell’RNA alle risposte cellulari allo stress, con effetti a valle sui programmi di sintesi proteica durante la crescita e la differenziazione. Alterazioni della funzione di TRMT1 sono state associate a fenotipi di neurosviluppo, rendendolo un bersaglio utile per studiare come le dinamiche di modifica dei tRNA modellino l’espressione genica neuronale e l’adattamento allo stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRMT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRMT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRMT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRMT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRMT1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRMT1 per lo studio della segnalazione di TRMT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TRMT1 critici per la funzione di TRMT1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRMT1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TRMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TRMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRMT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TRMT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TRMT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRMT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRMT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.