TRC8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429220
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TRC8 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TRC8, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TRC8 Anticorpo (H-9): sc-390347
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TRC8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-429220 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Rnf139 codifica a TRC8, uma ligase E3 de ubiquitina de múltiplas passagens transmembranares associada ao retículo endoplasmático, contendo um domínio RING finger. A TRC8 contribui para o controlo dependente de ubiquitina da estabilidade das proteínas, ligando o controlo de qualidade da membrana do RE e a regulação relacionada com esteróis e lípidos a vias mais amplas de proteostase. Ao modular a ubiquitinação e a degradação de determinados substratos, a TRC8 pode influenciar o controlo do crescimento celular, as respostas ao stress e redes de sinalização coordenadas no RE. A desregulação da sinalização por ubiquitina mediada por RNF139/TRC8 tem sido investigada no contexto de proliferação alterada e estabilidade do genoma, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de vias associadas a doença em modelos murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TRC8 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rnf139 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rnf139, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rnf139 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TRC8.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rnf139 para a investigação da sinalização de TRC8, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rnf139 críticos para a função TRC8
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rnf139 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TRC8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TRC8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rnf139. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TRC8 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TRC8 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rnf139 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rnf139 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.