Plásmido Doble Nickase (h) TRAC-1: sc-409980-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TRAC-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TRAC-1 (h) y el plásmido de doble nickasa TRAC-1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RNF125. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TRAC-1 | sc-409980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TRAC-1 | sc-409980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF125 codifica la ligasa E3 de ubiquitina humana TRAC-1, una proteína con dominio RING finger que ayuda a controlar el recambio de proteínas y la amplitud de la señal en células inmunitarias mediante vías proteasomales dependientes de ubiquitina. TRAC-1 se ha implicado en la regulación de las salidas de señalización del receptor de células T y de citocinas al modular la estabilidad y el tráfico de componentes de señalización, moldeando así la activación, la tolerancia y los programas transcripcionales posteriores. Como parte de redes más amplias de ubiquitinación, RNF125 se integra en circuitos reguladores de la inmunidad innata y adaptativa que influyen en las respuestas inflamatorias y en la función de los linfocitos impulsada por antígenos. La actividad desregulada de RNF125/TRAC-1 y los patrones de expresión alterados se han asociado con mecanismos de enfermedades inmunomediadas e inflamatorias, lo que respalda su uso como diana para estudiar la homeostasis inmunitaria y la reconfiguración de la señalización.
TRAC-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RNF125 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RNF125. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RNF125. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RNF125 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.