TRAC-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409980-ACT

RNF125はTRAC-1をコードしており、TRAC-1はRING型E3ユビキチンリガーゼとして、T細胞受容体経路およびサイトカイン応答経路における主要タンパク質のユビキチン化依存的な分解・代謝回転を調節することで免疫シグナル伝達を制御します。タンパク質の安定性とシグナル強度（振幅）をコントロールすることにより、TRAC-1はリンパ球の活性化、抗ウイルス応答、ならびにNF-κBやインターフェロン関連シグナルなどの下流で駆動される炎症性遺伝子プログラムに影響を与えます。RNF125の発現量や機能の変化は、免疫恒常性の破綻やがんに関連する免疫表現型と結び付けられており、免疫監視機構や腫瘍—免疫相互作用の研究において重要です。ヒト細胞モデルでは、シグナルの閾値や系統特異的な転写状態がユビキチン—プロテアソーム系によってどのように制御されるかを理解する目的で、RNF125がしばしば解析対象となります。

TRAC-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RNF125の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRAC-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RNF125 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRNF125転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRAC-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRNF125遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRAC-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRNF125発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRAC-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。