TPX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402581

概要

TPX2（targeting protein for Xklp2）は、微小管結合タンパク質をコードしており、有糸分裂紡錘体の組み立てと維持に必須です。具体的には、Ran-GTP依存的な染色体周辺での微小管核形成や、紡錘体極におけるAurora Aキナーゼの活性化／局在化に関与します。TPX2はまた、中心体の完全性、動原体線維（K-fiber）の形成、正確な染色体分配を支え、細胞周期の進行やゲノム安定性に関わる経路と結びついています。がん関連の文脈では、TPX2の発現異常は増殖性表現型や染色体不安定性としばしば関連しており、有糸分裂シグナル伝達研究における代表的なマーカー／機構的ハブとして広く用いられています。そのためヒトTPX2は、生物医学研究モデルにおいて、紡錘体チェックポイント機能、異数性、有糸分裂に起因する脆弱性メカニズムを検討する上で重要な対象です。

TPX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTPX2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TPX2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TPX2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TPX2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TPX2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TPX2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TPX2の機能に不可欠なTPX2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TPX2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TPX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTPX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TPX2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TPX2 HDRプラスミド（h）および TPX2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTPX2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTPX2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。