Tom20 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400041

概要

TOMM20は、ミトコンドリア外膜トランスロカーゼ（TOM）複合体の主要受容体であるTom20をコードしており、N末端のミトコンドリア移行シグナルを認識して、核コードタンパク質のミトコンドリアへの取り込みを開始します。Tom20はミトコンドリアタンパク質生合成を統括することで、酸化的リン酸化、ミトコンドリアダイナミクス、マイトファジー、ならびに細胞の代謝と生存を規定するストレスシグナル伝達経路に影響を与えます。TOMM20の発現変化やミトコンドリア輸入効率の低下は、神経変性疾患、心代謝性疾患、がんに伴う代謝リモデリングなどで観察されるミトコンドリア機能障害と関連づけられています。そのためTom20は、ミトコンドリア恒常性、プロテオスタシス、そしてオルガネラから核への情報伝達を研究するうえでの重要な機能ノードとして広く用いられています。

Tom20 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTOMM20遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TOMM20内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TOMM20のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Tom20タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Tom20シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TOMM20欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Tom20の機能に不可欠なTOMM20エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TOMM20ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Tom20 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTom20 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TOMM20遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Tom20 HDRプラスミド（h）および Tom20 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTOMM20ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTOMM20標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。