TOB2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404242-ACT

O TOB2 humano (transdutor de ERBB2.2) codifica uma proteína antiproliferativa da família BTG/Tob que modula a estabilidade/degradação de mRNAs e programas transcricionais que controlam a progressão do ciclo celular e a diferenciação. O TOB2 participa da regulação pós-transcricional por meio de interações com o complexo deadenilase CCR4–NOT e pode influenciar os sinais a jusante de vias como TGF-β/SMAD, MAPK e redes de receptores de fatores de crescimento. Ao moldar a expressão de genes de resposta imediata e a capacidade proliferativa, o TOB2 é relevante para estudos de biologia tumoral, ativação de células imunes e controle transcricional responsivo ao estresse. A expressão ou função desregulada de TOB2 tem sido associada a estados alterados de proliferação celular e tem sido investigada no contexto de assinaturas de expressão gênica associadas ao câncer.

TOB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TOB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TOB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TOB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TOB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TOB2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TOB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TOB2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TOB2 em células tumorais com expressão de TOB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.