TMEM5 Lentiviral Activation Particles (h): sc-411455-LAC

TMEM5 kodiert eine im Golgi-Apparat lokalisierte transmembrane Glykosyltransferase, die für die posttranslationale Modifikation von α‑Dystroglykan erforderlich ist, einem zentralen Rezeptor, der die extrazelluläre Matrix mit dem Zytoskelett verbindet. Durch seinen Beitrag zur Assemblierung funktioneller O‑mannosylierter Glykanstrukturen hilft TMEM5 dabei, die Zell‑Matrix‑Adhäsion, Interaktionen mit der Basalmembran sowie Signalprozesse zu regulieren, die die Gewebearchitektur unterstützen. Eine Störung dieses Glykosylierungswegs beeinträchtigt die Ligandenbindung von α‑Dystroglykan und ist mit dystroglykanopathischen Phänotypen assoziiert, was TMEM5 als wichtigen Knotenpunkt in der glykosylierungsabhängigen neuromuskulären und Entwicklungsbiologie hervorhebt. Entsprechend wird TMEM5 häufig im Kontext der Glykobiologie, des Golgi‑Transports und der Organisation der extrazellulären Matrix untersucht.

TMEM5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TMEM5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TMEM5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TMEM5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TMEM5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TMEM5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.