TMEM205 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408587-ACT

TMEM205は、細胞膜などの細胞内膜系に局在すると予測される多回膜貫通型タンパク質をコードしており、膜輸送やトラフィッキング関連プロセスに影響を与えることで、細胞内区画の恒常性の維持に関与すると考えられています。TMEM205の発現は、細胞ストレス応答の変化や薬物輸送表現型の変動と関連づけられており、異物（キセノバイオティクス）への細胞曝露を調節する経路への関与が示唆されています。がん研究では、膜動態や小胞輸送が薬物の細胞内蓄積に影響する状況を中心に、TMEM205は化学療法への応答との関連でしばしば検討されています。これらの特性からTMEM205は、膜関連タンパク質が環境的・薬理学的ストレス因子に対する細胞適応をどのように調整するかを調べるうえで有用な標的となります。

TMEM205 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMEM205の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMEM205 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMEM205 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMEM205転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMEM205の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMEM205遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMEM205依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMEM205発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMEM205経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。